绒猴EBV转化的白细胞(B95-8)
细胞用途:仅供科研使用。本公司的细胞培养操作规程,供参考1)培养基及培养冻存条件准备:准备 RPIVM-1640 培养基(RPMI-1640: GIBCO,货号 21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37°C,培养箱湿度为 70%-80%。冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。2)细胞处理:复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管迅速放入37°C水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入lmL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。(B95-8)细胞介绍B95-8细胞株源自暴露于人白血球中抽提的EB病毒的绒猴白血球。B95-8是一个连续株并释放高滴度的转染EB病毒。此细胞株提供EB病毒用于建立人的连续淋巴细胞株。细胞特性1)来源:外周血淋巴细胞2)形态:淋巴母细胞样,悬浮生长3)含量:>lxl06 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装细胞接受后的处理:1.收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。2.请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37°C培养约2-3h〇3.弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。4. 如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。5.接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹句,将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应将细胞收集,1000RPM,常温条件下离心5分钟,少量保存上清液(防止细胞吸走),加入部分新鲜培养基,吹打均匀后,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。注意事项:收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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