人皮肤黑色素瘤细胞(SK-MEL-1)细胞介绍该细胞由Oettgen F及其同事从一名29岁的患有广泛、快速进展性恶性黑色素瘤 的白人男性患者的胸导管中分离建立的。该细胞可产生黑色素,电镜检测发现细 胞中色素颗粒与自身合成和吞噬作用相关。在63%的恶性黑色素瘤患者和10%其 他疾病患者体内发现了针对该细胞系的抗体。细胞特性1)来源:皮肤黑色素瘤2)形态:球形,悬浮生长3)含量:>lxl06 个/mL4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性5)规格:T25瓶或者lmL冻存管包装运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后 立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细 胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。细胞用途:仅供科研使用。细胞培养步骤1)培养基及培养冻存条件准备:1.准备 MEM-EBSS 培养基(Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle ’ s Balanced Salts) (MEM-EBSS))( MEM,GIBCO,41500034,添加 EBSS),90%;优质胎牛血清,10%。2.培养条件:气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱 湿度为95%。3.冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。2)细胞处理:复苏细胞:将含有lmL细胞悬液的冻存管在37°C水浴中迅速摇晃解冻,加 入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补 加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将 细胞悬液加入l〇cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检 查细胞密度。细胞传代:对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加l-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培养基的 新皿中或者瓶中。方法二:可选择半数换液方式,弃去半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细 胞悬液按1: 2到1: 3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时,应 将细胞收集,1000RPM条件下离心4分钟,少量保存上清液(防止细胞吸 走),加入部分新鲜培养基,加入到冻存管中,在冻存管中加入10%DMSO 后进行冻存。注意事项:收到细胞后,若发现干冰己挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立 即与我们联系。所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注 意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
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