ELISA试剂盒实验条件

<p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋体">（</font>1<font face="宋体">）</font><strong><font face="宋体"> </font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋体">试剂盒</font></strong><font face="宋体">固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是</font><font face="Calibri">40</font><font face="宋体">孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一</font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋体">试剂盒实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋体">（</font>2<font face="宋体">） </font><strong><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋体">试剂盒</font></strong><font face="宋体">包被抗体（或抗原）的选择：将抗体（或抗原）吸附在固相载体表面时，要求纯度要好</font><font face="Calibri">,</font><font face="宋体">吸附时一般要求</font><font face="Calibri">PH</font><font face="宋体">在</font><font face="Calibri">9.0</font><font face="宋体">～</font><font face="Calibri">9.6</font><font face="宋体">之间。吸附温度，时间及其蛋白量也 有一定影响</font><font face="Calibri">,</font><font face="宋体">一般多采用</font><font face="Calibri">4</font><font face="宋体">℃ </font><font face="Calibri">18</font><font face="宋体">～</font><font face="Calibri">24</font><font face="宋体">小时。蛋白质包被的最适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度（</font><font face="Calibri">0.1</font><font face="宋体">、</font><font face="Calibri">1.0</font><font face="宋体">和</font><font face="Calibri">10</font><font face="宋体">&mu;</font><font face="Calibri">g/ml</font><font face="宋体">等）进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳 性标本的</font><font face="Calibri">OD</font><font face="宋体">值。选择</font><font face="Calibri">OD</font><font face="宋体">值最大而蛋白量最少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为</font><font face="Calibri">1</font><font face="宋体">～</font><font face="Calibri">10</font><font face="宋体">&mu;</font><font face="Calibri">g/ml</font><font face="宋体">。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋体">（</font>3<font face="宋体">） 酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接</font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋体">法进行初步效价的滴定（见酶标记抗体部份）。然后再固定其它条件或采取&ldquo;方阵法&rdquo;（包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度）在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p> <p class="MsoNormal"><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><font face="宋体">（</font>4<font face="宋体">） 酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体（如</font><font face="Calibri">OPD</font><font face="宋体">等）有潜在的致癌作用，应注意防护。有 条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如</font><font face="Calibri">TMB</font><font face="宋体">和</font><font face="Calibri">ABTS</font><font face="宋体">是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常</font><font face="Calibri">ELISA</font><font face="宋体">试剂盒底物作用时间，以</font><font face="Calibri">10-30</font><font face="宋体">分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是</font><font face="Calibri">H2O2</font><font face="宋体">在临用前加入。</font></span><span style="mso-spacerun:'yes';font-family:宋体;mso-ascii-font-family:Calibri;mso-hansi-font-family:Calibri;mso-bidi-font-family:'Times New Roman';font-size:9.0000pt;mso-font-kerning:1.0000pt;"><o:p></o:p></span></p>