细胞培养上清液ELISA检测的样品制备方法

对于细胞样品，可根据目标物的位置选择细胞裂解液或细胞培养上清液作为样品。由于细胞样品存在诸多干扰因素，例如细胞状态、细胞数量、pH值、培养基盐离子浓度、采样时间等，可能会出现样品无法检测的情况。如果目标物质为分泌物且主要在细胞外，则可选择细胞培养上清液作为样品。这里我们主要介绍细胞培养上清液样品制备的相关因素。  <img src="/images/upload/Image/微信图片_20250319113012.jpg" width="300" height="225" alt="elisa试剂盒" /> <h3>    样品制备方法<o:p></o:p></h3>       1、收集细胞培养上清液<o:p></o:p>       使用96、24、6孔板，（贴壁或悬浮）细、6-10mm培养皿，T25/T75细胞培养瓶等时，（贴壁或悬浮）细胞密度需达到60-90%。<o:p></o:p>       悬浮细胞：在2-8°C下以2500rpm离心5分钟，收集澄清的细胞培养上清液。<o:p></o:p>       贴壁细胞：直接收集上清，2-8℃、2500rpm离心5分钟，收集澄清的细胞培养上清。<o:p></o:p>       2、样品预处理<o:p></o:p>       样品通过离心、蛋白沉淀等方法进行预处理，以去除可能影响ELISA结果的干扰物质，如细胞碎片、细胞残留物等。可通过离心将细胞碎片沉淀，并将上清液转移至新的试管中。<o:p></o:p>       3、稀释样品<o:p></o:p>       根据ELISA试剂盒的建议，上清液可能需要适当稀释，以确保样品浓度在试剂盒的检测范围内。浓度过高或过低都可能影响检测的灵敏度和线性范围。<o:p></o:p>       4、对照样品<o:p></o:p>       准备阳性和阴性对照样品。阳性对照含有已知浓度的目标蛋白，用于构建标准曲线。阴性对照通常不含目标蛋白，用于检测非特异性结合和背景信号。<o:p></o:p>       5、冷冻样本<o:p></o:p>       如果无法立即进行ELISA检测，可以将样本冷冻保存，以确保样本的稳定性。冷冻前，请确保样本不存在因冻融引起的结构变化。尽量避免多次冻融样本，因为这可能会导致蛋白质降解和丢失。<o:p></o:p>       防范措施<o:p></o:p>       单次检测每个样本的采集体积为100ul。如果对同一样本进行N次检测，则需要N个100ul的采集体积。如果使用多个孔，则样本体积需加倍。<o:p></o:p>       样本若在一周内采集并检测，可保存于2-8℃，若未及时检测，请分装后冷冻于-20℃或-80℃，避免反复冻融。<o:p></o:p>       试剂盒的检测范围不等于样品中分析物的浓度范围，建议实验前通过相关文献估算样品中分析物的浓度，并通过预实验确定样品的浓度。<o:p></o:p>       标本应新鲜检测。如果存在细菌污染，细菌可能含有内源性HRP，也可能产生假阳性反应。如果在冰箱中保存时间过长，可能会发生聚集，导致间接ELISA检测背景加深。<o:p></o:p>       反复冻融会降低蛋白滴度，因此若待测样本需要多次检测，应单独包装冷冻保存。<o:p></o:p>

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