用于ELISA实验的组织提取物制备SOP

<p>&nbsp;<span style="font-size: 12px;"> &nbsp; &nbsp;ELISA（酶联免疫吸附试验）检测的样本类型包括常见的血液（血清、血浆）、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液，以及不常见的皮肤组织、尿液、粪便、肺泡灌洗液、冲洗液、唾液、脑脊液、胸腹水等。这些样本的采集时间、处理方法以及保存方式都会影响ELISA实验的结果。以下总结了常见的组织样本处理方法。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 组织提取物样品可能指从生物组织中提取的物质样品，例如DNA、RNA、蛋白质等。该过程通常涉及分离和纯化目标分子，以供进一步分析或实验</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 组织样本通常制成组织匀浆并进行如下处理：</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 1.收集组织，用冰冷生理盐水冲洗，去除血液，用滤纸擦干，称重，除去附着的结缔组织，称量组织块。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 2.用移液器量取0.1MPBS或使用0.86%冷生理盐水。均质液或生理盐水的总体积应为组织块重量的9倍。用眼科剪尽快（自然）剪开组织块。操作应在冰水浴中进行，将装有组织的小烧杯放入冰水中。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 3.均质方法有多种：</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; a)手工均质：将切碎的组织倒入玻璃均质管中，再用剩余的1/3均质培养基或生理盐水冲洗烧杯中剩余的组织碎块，一起倒入均质管中。均质时，左手握住均质管，将下端插入盛有冰水混合液的容器中。右手将捣棒垂直插入套管，上下研磨数十次（6～8分钟），研磨充分，使组织均质成浆。b</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; b)机械均质：用组织捣碎机在10000～15000r/min转速下上下研磨，可制成10%的组织匀浆。也可用内切式组织匀浆机进行制备（匀浆时间：10秒/次，间隙30秒，在冰水中连续3～5次），皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 4.将配制好的10%匀浆液放入离心机，4℃、3000rpm离心15分钟，保留离心匀浆液的上清液，弃去下面的沉淀物。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 5.取上清液。分装后冷冻备用。2-8&deg;C保存24-48小时。-20&deg;C保存1个月。-70&deg;C保存6个月。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 6.根据您的实验需要，取适量上清液，进行各种ELISA测定。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp;</span><strong><span style="font-size: 12px;"> 样品保存</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">&nbsp; &nbsp; 样品处理过程即为收集目标蛋白的过程。由于蛋白质易变性降解，因此操作应尽可能温和。样品处理后的保存也至关重要，尤其要注意避免反复冻融。处理后的样品可密封后单独包装保存。4&deg;C下保存时间不应超过1周，-20&deg;C下保存时间不应超过1个月，-80&deg;C下保存时间不应超过2个月。标本使用前应缓慢平衡至室温，切勿加热使其融化。</span></div>