酶联生物教您细胞是怎么转染的

<p>转染 ，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技能。随着基因与蛋白功用研讨的深化，转染目前已成为试验室工作中常常涉及的根本办法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微打针和基因枪归于通过物理办法将基因导入细胞的范例；化学介导办法许多，如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染办法、和多种阳离子物质介导的技能；生物介导办法，有较为原始的原生质体转染，和现在比较多见的各种病毒介导的转染技能。</p> <p>抱负细胞转染办法，应该具有转染功率高、细胞毒性小等优点。病毒介导的转染技能，是目前转染功率的办法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是，病毒转染办法的准备程序杂乱，常常对细胞类型有很强的挑选性，在一般试验室中很难遍及。其它物理和化学介导的转染办法，则各有其特色。<br /> 需求指出的一点，无论采用哪种转染技能，要取得*优的转染成果，或许都需求对转染条件进行优化。影响转染功率的因素许多，从细胞类型、细胞培育条件和细胞生长状况，到转染办法的操作细节，都需求考虑。<br /> 一、细胞传代<br /> 1. 试验准备：200ul/1mlTip头各一盒（以上物品均需高压灭菌），酒精棉球，废液缸，试管架，微量移液器，记号笔，培育皿，离心管。<br /> 2. 弃掉培育皿中的培育基，用1ml的PBS溶液洗刷两次。<br /> 3. 用Tip头参加1ml Trypsin液，消化1分钟（37℃，5%CO2 ）。用手轻拍培育瓶壁，调查到细胞彻底从壁上脱落下来为止。<br /> 4. 参加1ml的含血清培育基停止反应。<br /> 5. 用Tip头多次吹吸，使细胞彻底分散开。<br /> 6. 将培育液装入离心管中，1000rpm离心5min。<br /> 7. 用培育液重悬细胞，细胞计数后挑选0.8X106个细胞参加一个35mm培育皿。<br /> 8. 将适宜体积彻底培育液参加离心管中，混匀细胞后悄悄参加培育皿中，使其均匀分布。<br /> 9. 将培育皿转入CO2培育箱中培育，第二天转染。<br /> 二、细胞转染<br /> 1. 转染试剂的准备<br /> ① 将400ul去核酸酶水参加管中，震动10秒钟，溶解脂状物。<br /> ② 震动后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震动。<br /> 2. 挑选适宜的混合比例（1：1－1：2/脂质体体积：DNA质量）来转染细胞。在一个转染管中参加适宜体积的无血清培育基。参加适宜质量的MyoD或者EGFP的DNA，震动后在参加适宜体积的转染试剂，再次震动。<br /> 3. 将混合液在室温放置10―15分钟。<br /> 4. 吸去培育板中的培育基，用PBS或者无血清培育基清洗一次。<br /> 5. 参加混合液，将细胞放回培育箱中培育一个小时。<br /> 6. 到时后，依据细胞品种决议是否移除混合液，之后参加彻底培育基持续培育24－48小时。<br /> 三、第2次细胞传代<br /> 1. 在转染后24小时，调查试验成果并记录绿色荧光蛋白表达状况。<br /> 2. 再次进行细胞传代，依照免疫染色适宜的密度0.8X105个细胞/35mm培育皿将细胞从头转入培育皿中。<br /> 3. 在正常条件下培育24小时后依照染色要求条件固定。&nbsp;</p>