如何解决 ELISA 结果中的高背景噪音

<p> <span style="font-size: 12px;">    ELISA实验高背景噪音会导致假阳性结果，了解高背景的因素至关重要。本文从样品质量、包被缓冲液、阻断缓冲液、洗涤缓冲液、检测系统和数据分析带大家了解ELISA实验产生高背景的因素。了解这些因素可以避免后期实验出现假阳性，影响实验成本及时间。</span></p> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    </span><strong><span style="font-size: 12px;">样品质量</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    ELISA中高背景噪音的主要来源之一是样品质量。内毒素、去垢剂或蛋白质等污染物会干扰抗体或酶底物的结合，并产生假阳性信号。为避免这种情况，应使用清洁无菌的设备和试剂，妥善储存和处理样品，并避免反复冻融。您还应适当稀释样品，以避免饱和或干扰效应。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    </span><strong><span style="font-size: 12px;">包被缓冲液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    另一个可能影响ELISA背景噪音的因素是用于将捕获抗体或抗原附着到微孔板孔中的包被缓冲液。包被缓冲液应具有最佳的pH值和离子强度，以确保包被的稳定性和特异性。常见的包被缓冲液是碳酸盐-碳酸氢盐缓冲液，其pH值为9.6，适用于大多数蛋白质。然而，某些蛋白质可能需要不同的缓冲液，例如PBS（磷酸盐缓冲液）或MES（2-(N-吗啉基)乙磺酸），以避免变性或聚集。还应避免在包被缓冲液中添加叠氮化钠或其他防腐剂，因为它们会抑制酶活性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    </span><strong><span style="font-size: 12px;">阻断缓冲液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    封闭缓冲液用于在包被步骤后封闭微孔板孔上的非特异性结合位点。封闭缓冲液应与包被缓冲液和检测系统兼容，并且不应含有任何可能与抗体或酶底物发生反应的成分。常见的封闭缓冲液是BSA（牛血清白蛋白），其浓度可在PBS或TBS（Tris缓冲液）中使用，浓度为1-5%。然而，某些抗体或抗原可能需要不同的封闭剂，例如酪蛋白、明胶或奶粉，以降低交叉反应性或提高信噪比。您还应将封闭缓冲液孵育足够时间和温度，以确保完全覆盖孔板。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">   </span><strong><span style="font-size: 12px;"> 洗涤缓冲液</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    每次孵育步骤后，使用洗涤缓冲液去除微孔板孔中未结合或过量的试剂。洗涤缓冲液应与包被缓冲液和检测系统兼容，且不应含有任何可能影响结合或酶活性的成分。常用的洗涤缓冲液是含0.05-0.1%Tween20的PBS或TBS，它们可以降低表面张力并提高洗涤效率。然而，某些抗体或抗原可能需要不同的洗涤缓冲液，例如PBST（含0.1%TritonX-100的PBS）或TBST（含0.1%TritonX-100的TBS），以提高溶解度或特异性。您还应使用足够的体积和循环彻底、持续地清洗孔板，以避免任何残留试剂。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    </span><strong><span style="font-size: 12px;">检测系统</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    检测系统用于测量微孔板孔中结合分析物产生的信号。检测系统可以是比色法、化学发光法或荧光法，具体取决于所用的酶和底物。检测系统应针对检测的灵敏度和动态范围进行优化，并且在没有分析物的情况下不应产生任何背景信号。为此，您应该使用高质量且特异性的抗体，选择合适的酶和底物，严格按照孵育时间和温度的说明书。避免暴露在光线或空气中，因为它们会降低底物或信号。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">  </span><strong><span style="font-size: 12px;">  数据分析</span></strong></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    ELISA故障排除的最后一步是数据分析，用于解释结果并计算分析物的浓度。数据分析应使用合适的软件或方法（例如标准曲线或回归模型）进行，并应考虑任何异常值或误差。您还应使用适当的对照（例如空白、标准品和样品）来验证检测的准确度和精密度，并校正任何背景噪音。您还应绘制数据图表，并直观地检查信号的分布和变异性。</span></div> <div><span style="font-size: 12px;"><br /> </span></div> <div><span style="font-size: 12px;">    综合上述介绍，为了避免后期实验出现背景噪音高，影响实验成本及时间，结合自身的样本和实验要求须严格的按照说明书进行。如果你对目前ELISA试剂盒的背景噪音高问题还有疑问，欢迎前来咨询了解。</span></div>

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