ELISA试剂盒实验中通常有两次抗原抗体反响,即加标本和加酶联络物后。抗原抗体反响的完毕需求有必定的温度和时刻,这一保温进程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。
ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的联络只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为例,参加板孔中的标本,其间的抗原并不是都有对等的和固相抗联络的时机,只需最贴近孔壁的一层溶液中的抗原直接与抗体触摸。
这是一个逐渐平衡的进程,因此需经涣散才调抵达反响的完毕。在这今后参加的酶符号抗体与固相抗原的联络也相同如此。这便是为何ELISA反响老是需求必定时刻的温育。
温育常选用的温度有43℃、37℃、室温文4℃(冰箱温度)等。37℃是实验室中常用的保温温度,也是大多数抗原抗体联络的合适温度。在建立ELISA方法作反响动力学研讨时,实验标明,两次抗原抗体反响通常在37℃经1-2小时,产品的生成可达高峰。
为加快反响,可前进反响的温度,有些实验在43℃进行,但不宜选用更高的温度。抗原抗体反响4℃更为彻底,在放射免疫测定中多使反响在冰箱中过夜,以构成最多的堆积。但因所需时刻太长,在ELISA中通常不予选用。
ELISA试剂盒保温的方法除有的ELISA仪器附有特制的电热块外,通常均选用水浴,可将ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底应贴着水面,使温度活络平衡。
为防止蒸发,板上应加盖,也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔,此时可让反响板漂浮在水面上。若用保温箱,ELISA板应放在湿盒内,湿盒要选用传热性杰出的资料如金属等,在盒底垫湿的纱布,最终将ELISA板放在湿纱布上。
湿盒应先放在保温箱中预温至规则的温度,特别是在气温较低的时分更应如此。无论是水浴仍是湿盒温育,反响板均不宜叠放,以确保各板的温度都能活络平衡。室温温育的反响,操作时的室温应严重束缚在规则的范围内,标准室温温度是指20-25℃,但具体操作时可根据说明书的央求操控温育。
室温温育时,ELISA板只需平置于操作台上即可。应留神温育的温度和时刻应按规则力求精确。为确保这一点,一个人操作时,一次不宜多于两块板一同测定。
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