今日详解：ELISA试剂盒样本的重要性

ELISA即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。 由于ELISA方法简单，方便，灵敏，特异性强且不需要特殊设备（只需要酶标仪就可以），所以被广泛应用于各种抗原和抗体测定。

但是影响ELISA测定的因素有很多，而其操作中需要有一定的技术要求，如操作手法，环境，样本等，有时常可见到一些错误结果（即假阳性或假阴性）等，样本的重要性关系到整个实验的结果，上海极威生物为大家解读ELISA检测的影响因素之一-样本的影响

1、样本的保存：

在冰箱中保存过久的标本，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、会造成假阳性；为避免上述问题，在ELISA试剂盒测定血清标本时zui好能新鲜采集；

如果不能立即测定，根据相应的时间保存相应的温度，5 d内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应-20℃低温冻存；如冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。

2、样本的时间：

因为塑料试管能吸附抗原物质，所以样本长时间放在塑料管内会使样本内抗原含量下降造成假阴性。zui好的方法是使用真空采血管；

并使用非抗凝标本，肝素抗凝血浆会增加OD值，EDTA、酶抑制剂（如NaN3）可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性。

3、样本受细菌污染：

因菌体中可能会含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，可能会产生非特异性显色而干扰测定结果。

4、样本的凝固：

样本凝固不全。在实验中，有的时候心急为了争取时间快速检测，ELISA试剂盒在血液还未开始凝固的时候就强行离心分离血清，导致血清中仍残留部分纤维蛋白原，在ELISA测定过程中形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果；因此血液标本采集后必须使其充分凝固后再分离血清。

5、样本溶血：

溶血标本及混有红细胞的血清采用ELISA法检测易产生假阳性。可能是溶血血清中含有过氧化酶物质（红细胞或血红蛋白中的亚铁血红素）。

ELISA试剂盒在洗涤过程中往往难以完全洗脱，它可使H2O2释放出原生态氧（O），从而催化底物四甲基联苯胺生成可溶性的有色物质，即显蓝色，产生假阳性［2］。所以严重溶血标本禁用。