ELISA试剂盒用作双抗体夹心法检测

<p>&nbsp;因此在运用一步法<strong>ELISA试剂盒</strong>测定标本中含量可反常增高的物质（例如血清中HBsAg、AFP和尿液hCG等）时，应留意可测规模的最高值。用高亲和力的单克隆抗体制备此类试剂可削弱钩状效应。<br /> 倘若在被测分子的不同位点上富含多个一样的决定簇，例如HBsAg的a决定簇，也可用针对此决定的同一单抗分别包被固相和制备酶联系物。但在HBsAg的检查中应留意亚型疑问，HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型，尽管每种亚型均有一样的a决定簇的反响性，这也是用单抗作夹心法应留意的疑问。<br /> <strong>ELISA试剂盒</strong>双抗体夹心法测抗原的另一留意点是类风湿因子（RF）的搅扰。RF是一种本身抗体，多为IgM型，能和多种动物IgG的Fc段联系。血清标本中如富含RF，它可充任抗原成份，一起与固相抗体和酶标抗体联系，表现出假阳性反响。选用F（ab'）或Fab片段作酶联系物的试剂，因为去掉了Fc段，然后消除RF的搅扰。双抗体夹心法ELISA试剂是否受RF的影响，已被列为这类试剂的一项查核目标（拜见6.2）。<br /> 双抗体夹心法适用于测定二价或二价以上的大分子抗原，但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原，因其不能构成两位点夹心。直接法是检查抗体常用的办法。其原理为利用酶符号的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）以检查与固相抗原联系的受检抗体，故称为直接法（见图2-3）。操作进程如下：<br /> 1）将特异性抗原与固相载体联合，构成固相抗原。洗刷除掉未联系的抗原及杂质。<br /> 2）加稀释的受检血清，保温反响。血清中的特异抗体与固相抗原联系，构成固相抗原抗体复合物。经洗刷后，固相载体上只留下特异性抗体，血清中的其他成份在洗刷进程中被洗去。<br /> 3）加酶标抗抗体。可用酶标抗人Ig以<strong>ELISA试剂盒</strong>检查总抗体，但通常多用酶标抗人IgG检查IgG抗体。固相免疫复合物中的抗体与酶标抗体抗体联系，然后直接地符号上酶。洗刷后，固相载体上的酶量与标本中受检抗体的量正相关。<br /> 4）加底物显色<br /> 直接法成功的关键在于抗原的纯度。尽管有时用粗提抗原包被也能获得实践有用的结果，但应尽可能予以纯化，以进步实验的特异性。格外应留意除掉能与通常健康人血清发作反响的杂质，例如以E.Coli为工程酶的重组抗原，如其间富含E.Coli成份，很可能与受过E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗体发作反响。ELISA试剂盒抗原中也不能富含与酶标抗人Ig反响的物质，例如来自人血浆或人体安排的抗原，如不将其间的Ig去掉，实验中也发作假阳性反响。别的如抗原中富含无关蛋白，也会因竟争吸附而影响包被作用。</p>