人三碘甲状腺原氨酸(T3)ELISA试剂盒
简介
三碘甲状腺原氨酸(T3)是一种甲状腺激素。T3及其原激素甲状腺素（T4）的生产由甲状腺刺激素（TSH）激活，TSH由垂体前叶释放。这一途径是一个闭环反馈过程的一部分。血浆中T3和T4的浓度升高，抑制了垂体前叶的 TSH 的产生。它是真正的荷尔蒙。它对目标组织的影响大约是T4的四倍。在产生的甲状腺激素中，只有大约 20%是T3，而80%是T4。T3的半衰期约为2.5天
本酶联免疫检测试剂盒可以经济、快速地检测样本中T3的含量。
检测原理
本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中T3和微孔条上预包被的偶联抗原竞争T3抗体，加入酶标二抗后，形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物。随后结合的酶催化TMB底物显色，样本吸光值与其含有的T3成负相关，通过标准曲线可准确定量样品中T3的含量。通过标准曲线计算所得值乘以样品处理的稀释倍数即为实际样品中T3的含量。
间接竞争法模式图
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按操作顺序形成包被抗原-抗体-酶标二抗复合物后，加入TMB 底物，板孔液体由无色变成蓝色，再加入终止液液体变为黄色后进行吸光度值测定。
检测实验的局限性
仅供科研使用。
试剂盒的使用期限不得超过试剂盒标签上的有效期。不要将试剂与其他批次或来源的试剂混合使用或替换使用。
如果样品产生的值高于最高标准，则用测定稀释剂进一步稀释样品，并重复测定。稀释剂、操作人员、移液技术、洗涤技术、培养时间或温度以及试剂盒使用年限的任何变化都可能导致结合变化。
样本采集、处理和存储的变化可能会导致样本值的差异。本试剂盒实验设计消除了不同样品中可能潜在的干扰因素的影响，但并不能涵盖所有潜在影响因素。不能排除存在其他干扰的可能性。
操作要点
为了避免交叉污染，在添加每个标准品、样品和试剂时应更换移液器枪头。
当使用自动洗板机时，在加入洗涤缓冲液后加入30秒的浸泡期，或者在洗涤步骤之间将板旋转180度，可以提高测定精度。
显色剂应保持无色，直到添加到板中。确保显色剂不受光线照射。
应按照与显色剂相同的顺序将终止液添加到板中。加入终止液后，孔中形成的颜色将从蓝色变为黄色。蓝色的孔表示终止液未与溶液充分混合。
需要的其他材料
1. 酶标仪，包含450nm测定波长，同时包含600-680nm校正波长更佳；
2. 移液器及枪头；
3. 蒸馏水或去离子水
4. 100-1000mL刻度量筒。
5. 洗瓶、排枪或自动微孔板清洗机。
6. 水平轨道微孔板振荡器，能够保持500±50 rpm的速度。
7. 用于稀释标准品和样品的试管。
注意事项
此试剂盒提供的终止液为稀硫酸溶液，具有一定腐蚀性，应谨慎操作。
该试剂盒中的某些成分含有防腐剂，可能会引起皮肤过敏反应，应佩带口罩避免吸入薄雾。
显色剂B可能会引起皮肤、眼睛和呼吸道刺激，应佩带口罩避免吸入薄雾。
佩戴防护手套、防护服、眼睛和面部防护用品。处理后彻底洗手。
样品预处理
下面列出的样品收集和储存条件旨在作为一般性指导。样品稳定性尚未评估。
1.血清：将收集于血清分离管的全血样本在室温放置2小时或4℃过夜，然后 3000r/min 离心10min，取上清即可检测。
2.血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集样本，将样本 3000r/min 离心10min，取上清即可检测。
3.组织匀浆：用 PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的 PBS（一般按 1:9 的重量体积比，比如1g的组织样品对应 9mL的PBS）。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液 3000r/min 离心10min，取上清即可检测。
4.细胞培养物上清：3000r/min 离心10min，取上清即可检测。
5.尿样：取尿样本上清50µL进行检测。（如混浊需离心或过滤）
样品稀释倍数：0.5倍
6.其它生物标本：3000r/min 离心10min，取上清即可检测
试剂准备
使用前将所有试剂置于室温平衡30分钟左右。
洗涤液/稀释液配制：
如果洗涤液/稀释液（20×）有晶体析出，需在37℃下加热⾄晶体全部溶解。用蒸馏水1:20稀释（例如：1mL 浓缩洗涤液加入19mL的蒸馏水）
标准品配制：
试剂盒中取出标准品，准备6个试管，先将1000ng/mL标准品（200µL）按需吸取一定量用1×稀释液稀释至3000pg/mL（例：3µL的标准品母液+997µL的1×稀释液，制备得到1000μL的3000pg/mL浓度标准品），随后在5个试管中分别加入600μL的1×稀释液，在这5个单独的试管中将3000 pg/mL标准品依次3倍倍比稀释至6个梯度，共配制6个浓度的标准品，依次为：3000pg/mL、1000pg/mL、333pg/mL、111pg/mL、37pg/mL、12.33 pg/mL，从最高浓度标准品溶液中吸取300μL标准品到下一个试管中，轻轻吹打混匀，以此类推进行标准品的倍比稀释（如图所示），1×稀释液用作零浓度标准品(0pg/mL)。
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一抗工作液配制：
使用前10分钟，用1×稀释液将100×一抗工作液稀释成1×一抗工作液，根据所需用量配置。
酶标二抗工作液配制：
使用前10分钟，用1×稀释液将100×酶标二抗稀释成1×酶标抗体工作液，根据所需用量配置。
备注：
如样本中待测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况选择适当的稀释倍数 (建议：将待测样本用样品稀释液最低稀释1倍，在正式实验之前做预实验，以确定具体稀释倍数) ；标准品母液及100×酶标二抗溶液根据实验所需酶标板孔数吸取一定量配制工作液，剩余溶液应放回-20℃储存，且避免反复冻融。（若实验在1-2周内做完，标准品母液及100×酶标抗体置于2-8℃保存；若实验为长时间跨度实验，建议将标准品母液及100×酶标抗体置于-20℃保存，以保证实验结果的稳定性）
实验步骤
所有标准品、样品建议复孔检测
1.样本孵育：每孔分别加入50μL不同浓度的标准品/预处理过的待测样品，同时加入一抗试剂50µL/孔（加一抗试剂时请使用多道移液器），盖上封板膜在37℃下孵育30分钟。孵育结束后，每孔加入300μL 1×洗涤缓冲液，轻轻晃动30秒，甩干并在纸上拍干，以这种方式清洗3次。
2.二抗孵育：每孔加入100μL酶标抗体工作液，轻轻混匀，盖上封板膜在37℃下避光孵育30分钟。孵育结束后，重复步骤1中的清洗方式清洗4次。
3.底物显色：每孔首先加入50μL显色液A，随后加入50μL显色液B，轻轻混匀，盖上封板膜在37℃下避光孵育15分钟。（加显色液时请使用多道移液器，根据样品和对照抗体的颜色，自行控制显色时间）
4.终止反应：待显色反应结束后，每孔加入50μL终止液（加终止液时请使用多道移液器），轻轻混匀，5分钟内用预热完成的酶标仪在450nm处测吸光值。
精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在同一个板块内精度评估。
批内变异系数 CV%小于10%。
批间精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。
批间变异系数 CV%小于15%。
回收率
样本回收率：80%-120%
灵敏度
经样本测试，本试剂盒的检测灵敏度为12.33pg/mL。
线性关系
校准品剂量反应曲线相关系数r值，大于等于0.998。
交叉反应性
无
实验步骤汇总
1.加标准品/样品和一抗，37℃反应30分钟，洗涤3次。
2.加酶标二抗，37℃反应30分钟，洗涤4次。
3.加显色液，37℃避光反应15分钟。
4.加终止液，在5分钟内读数。
结果的计算
以浓度的对数为横坐标，OD值为纵坐标，绘出四参数逻辑函数的标准曲线。或者使用能够生成四参数逻辑（4-P）曲线拟合的计算机软件来创建标准曲线。
若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测并在计算样本浓度时乘以相应的稀释倍数。
数据和曲线图详情，请点击下载说明书
酶联生物经过不断的实验优化和改进，积累了大量的经验，拥有专业的酶联研发团队。利用专业的酶联免疫技术自主研发的elisa试剂盒，能对血清及其它样本定量检测抗原，定性检测特异性抗体。优质的试剂，先进的仪器和正确的操作是保证ELISA检测结果准确可靠的必要条件。ELISA检测的方便性、稳定性、重复性和可靠性方面都具有很大的优势。
ELISA检测技术服务内容：
1、双抗体夹心法检测抗原 2、间接法检测抗体 3、为客户提供各种ELISA技术进行样本检测。
以上代测费，凡购买本公司试剂盒，我们免费代测！
凡购买本公司目录任何一种酶联免疫检测试剂盒，您只需将需要检测的动物（Human, Rat, Mouse, Rabbit, Monkey,
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二、样本要求
在收集标本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。我们提倡新鲜标本尽早检测，对收集后当天就进行检测的标本，及时储存在4℃备用，如有特殊原因需要周期收集标本，请造模取材后，将标本及时分装后放在-20℃或-70℃条件下保存。因冰室与室温存在一定温差，蛋白极易降解，直接影响实验质量，所以避免反复冻融。代测放免标本的客户取材前须向我司销售人员索要说明书，具体操作注意事项请与我司技术人员沟通。
液体类标本：标本必须为液体，不含沉淀。包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等。
血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
血浆：应根据试剂盒的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，加入10%（v/v）抗凝剂(0.1M柠檬酸钠或1%heparin
或2.0%EDTA.Na2)混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
尿液、胸腹水、脑脊液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。如有沉淀形成，应再次离心。
细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.0-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，缓冲液中可加入1μg/L蛋白酶抑制剂或50U/ml的Aprotinin（抑肽酶）。用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清置于-20度或-70度保存，如有必要，可以将样品浓缩干燥。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
三、寄标本时需注明以下情况：
1、标本编号；2、所测项目；3、是否做复孔；3、联系方式；4、实验后标本是否寄回。
客户须知：
客户应对所提供的材料及信息负责，如因客户提供的材料及信息不准确而引起的实验延误或经济损失由客户承担。
详解七个农药残留的检测操作流程
一、样品采集
1. 在进行农药残留检测前，首先需要进行样品采集，样品可以是农产品、土壤、水、空气等，在采集前需要根据检测要求确定采样点和采样方法，并记录采样时间、地点和数量等相关信息，
2. 检测第一步，也是最关键的一步，采集的样品应具有代表性，能够真实反映农产品的整体情况，同时，采集过程中要注意避免交叉污染，确保样品的纯净性。
二、样品前处理
1. 对于生物样品（如农产品等），需要进行样品前处理，以去除影响检测结果的杂质和干扰物。样品前处理通常包括样品分离、萃取和净化等步骤，可以采用溶剂萃取、固相萃取、液液分配等方法进行。
2. 采集回来的样品需要进行适当的处理，如破碎、匀浆等，以便后续的提取和分析，处理过程中要注意操作规范，避免对样品造成污染或损失。
三、提取农药残留
通过特定的提取剂和方法，将农产品中的农药残留提取出来，为后续的分析做好准备。
四、净化与浓缩
提取出的农药残留可能含有杂质，需要进行净化处理。同时，为了提高检测灵敏度，还需要对提取液进行浓缩。
五、检测方法
农药残留检测方法主要包括物理检测方法和化学检测方法。物理检测方法包括显微镜检测、紫外光检测等，但这些方法仅能检测到存在于样品表面的农药残留。化学检测方法包括色谱法、质谱法、光谱法等，具有高灵敏度、高准确性和高特异性等优点。
六、注意事项
进行农药残留检测时，需要注意4个事项：
1. 样品收集、保存和运输要求严格，避免污染和变质。
2. 在操作中要注意自身防护，避免接触有毒有害物质。
3. 样品前处理和检测方法需要根据样品特性进行优化和调整，避免误差和干扰。
4. 样品分析前需要进行质控和检测方法验证，以保证结果准确可靠。
七、解决方案
针对不同的农药残留检测需求，可以采用不同的解决方案，有些实验室提供农药残留分析服务，可以根据样品特性和检测要求，进行针对性的检测方案和操作流程，保证结果的准确性和可靠性，同时，一些农药生产企业也提供农药残留检测服务，可以提供有针对性的解决方案和专业的技术支持，在操作中需要严格按照样品采集、前处理和检测方法等环节进行操作，并注意安全防护和质控措施，选择合适的解决方案和技术支持，可以提高检测效率和准确性。
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