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感受态细胞 >
发根农杆菌感受态细胞MSU440 Chemically Competent Cell说明书产品货号: ML-G2071
保存条件: -80℃
产品规格: 10×100μl 50×100μl 100×100μl
产品介绍基 因 型Agrobacterium rhizogenes(strR ) MSU440 Ri (agropine type)简 要 说 明MLBio发根农杆菌是根瘤菌科(Rhizobiaceae)农杆菌属(agrobacterium)的一种革兰氏阴性土壤细菌,它能够感染大多数双子叶植物和少数单子叶植物以及个别裸子植物。 MSU440发根农杆菌菌株含有农杆碱型Ri质粒,具有广泛的宿主范围(玉米,烟草,茶树,青蒿等),同时具有链霉素抗性。本公司生产的 MSU440化学转化感受态细胞经特殊工艺制作,pCAMBIA2301质粒(卡那霉素抗性)检测,转化效率>104 cfu/μg DNA。操 作 说 明1.取-80℃保存的MSU440发根农杆菌感受态于室温或手心片刻待其部分融化,处于冰水混合状态时插入冰中。2.每100μl感受态加入0.01-1 μg质粒DNA(转化效率较高,第一次使用前最好做预实验确定所加质粒的量)用手快速、剧烈拨打管底混匀或用枪吹吸混匀,依次放于冰中静置5分钟、液氮5分钟、37℃水浴5分钟、冰浴5分钟。3.冰浴中拿出放室温,加入700μl 无抗生素的TY 液体培养基,于 28℃振荡培养 2小时。4.6000 rpm 离心一分钟收菌,留取 100 μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的 TY平板上,倒置放于 28℃培养箱培养 2-3 天注 意 事 项1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10;质粒不纯或存在乙醇等有机物污染,转化效率急剧下降;质粒增大一倍,转化效率下降一个数量级。2.混匀质粒时应用手指快速拨打管底或用枪吹吸混匀,务必使质粒快速、均匀分散开,与感受态细胞充分接触。转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3.平板上阳性克隆密度过大时,由于营养不足,阳性克隆生长变慢,菌落变小,为了获得大的菌落,应减少质粒用量或降低涂板的菌量。4.MSU440具有卡那霉素抗性,不可用于具有卡那霉素抗性质粒的转化。备 注1、农杆菌相关抗生素配方:
抗生素
配方
原液
工作液
羧苄青霉素(carb)
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌
50 mg/ml
50 μg/ml
硫酸卡那霉素(kan)
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌
50 mg/ml
50 μg/ml
链霉素(strep)
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌
10 mg/ml
50 μg/ml
利福平(rif)
DMSO溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌
10 mg/ml
20 μg/ml
庆大霉素(gent)
双蒸水溶解,0.22 μm滤膜过滤除菌
20 mg/ml
40 μg/ml
2、常用农杆菌抗性:(R:抗;S:敏感。)
农杆菌菌株
羧苄青霉素(carb)
链霉素(strep)
利福平(rif)
庆大霉素(gent)
硫酸卡那霉素(kan)
AGL-1
R
S
R
S
S
EHA101
S
S
R
S
R
EHA105
S
S
R
S
S
LBA4404
S
R
R
S
S
GV3101
S
S
R
R
S
3、TY配方(1L):Tryptone 5gYeast extract 3g补水到1L体积,完全溶解后,121度、20分钟高温灭菌配制1M的氯化钙水溶液,121度、20分钟高温灭菌每1L 灭菌的TY液体营养液中加入10ml 无菌的1M氯化钙水溶液即可。若配制TY固体培养基,则加入15g 琼脂粉。
产品标签
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