Tuner(DE3)pLysS Chemically Competent Cell说明书产品货号: ML-G2059
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产品规格: 10×100μl 50×100μl
产品介绍基 因 型F -ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)pLysS CamR简 要 说 明Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的lacZY基因 (半乳糖苷透性酶基因)突变株,此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞,产生更加严格、均一的浓度依赖。将具有氯霉素抗性的pLysS质粒导入Tuner(DE3)细胞中即是Tuner(DE3) pLysS,pLysS表达T7溶菌酶,T7溶菌酶可以与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG诱导的表达,非常适合毒性蛋白的原核表达。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区 (DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶),可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。Tuner(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。操 作 说 明1.取100μl冰上融化的Tuner(DE3)pLysS感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。注 意 事 项1.感受态细胞最好在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。2.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。3.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-10 mM均可)。4.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。5. Tuner(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素,以防质粒丢失。
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