Tuner(DE3)Chemically Competent Cell说明书产品货号: ML-G2022
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产品规格: 10×100μl 50×100μl
产品介绍基 因 型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm lacY1 (DE3)简 要 说 明Tuner(DE3)菌株是BL21菌株的 lacZY基因(半乳糖苷透性酶基因)突变株,此突变导致IPTG以均一速度进入体系中大肠杆菌的每个细胞,产生更加严格、均一的浓度依赖。此菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体(如pET系列)的基因。λ噬菌体DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶,该区整合于Tuner的染色体上,所以称为Tuner(DE3) ,可同时表达T7 RNA聚合酶和大肠杆菌RNA聚合酶,可用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。MLBio High5TM系列Tuner(DE3)感受态细胞由特殊工艺制作,经pUC19质粒检测转化效率达107cfu/μg。操 作 说 明1.取100μl冰上融化的Tuner(DE3)感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟。2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。注 意 事 项1.MLBio感受态细胞最好在冰上融化。2.混入质粒时应轻柔操作。3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。4.诱导时,IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。5.为获得需要量的蛋白,最佳诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。
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用户评论(共6条评论)
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